Возникновение злоякісних опухолей

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Биология


Узнать стоимость

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

року міністерство освіти Російської Федерации

Уральський Державний Технічний Університет — УПИ

Кафедра Технології органічного синтеза

РЕФЕРАТ:

РОЛЬ ВІРУСІВ І ПЛАЗМІД У ОПУХОЛЕОБРАЗОВАНИИ

Виконав: студент грн. Х-449

Покровський П.В.

Екатеринбург

2001

1. Введение

Виникнення злоякісних (ракових) пухлин може мати різні причини, проте завжди до цього причетний генетичний матеріал клітини — її ДНК. Що б не спричинило створення пухлини (раковому переродженню), наступним зростанням тканини управляє ДНК нестримно делящихся пухлинних клітин. У основі перетворення нормальної клітини в злоякісну — пухлинної трансформації - лежить перенесення чи інше зміна ДНК. Агент, викликає пролиферацию клітин, — це продукт гена. До цього часу, щоправда, не вдається створити загальну теорію, що охоплювала б, усе форми ракового переродження, проте вивчення злоякісних пухлин, викликаних вірусами і плазмідами, вже нині дозволяє: зробити далекосяжні выводы.

Ми розглянемо три прикладу онкогенеза: 1) утворення пухлин у рослин, 2) розвиток пухлин у тварин під впливом ДНК-вирусов і трьох) розвиток пухлин у тварин під впливом РНК-вирусов (ретровирусов).

2. Освіта пухлин у растений.

В багатьох рослин зустрічаються пухлини кореневої шийки. Ці розростання тканини зменшують потік поживних речовин між підземними і надземними частинами. В багатьох рослин такі пухлини можна викликати експериментально; типові результати виходять більшу, ніж половини вивчених видів (рис. 1). Збудником є Agrobacterium tumefaciens — грам-отрицательная ґрунтова бактерія з перитрихальными жгутиками, подібна з офіційним представником роду Rhizobium. Бактерії пробираються у тканину через пошкоджені ділянки і розмножуються в межклетниках. Бувають вирулентные і авирулентные штами A. tumefaciens; вирулентные містять велику плазміду, так звану Ti- плазміду (Ti — Tumor Inducing, индуцирующая пухлина). Після зараження тканини плазміди пробираються у рослинні клетки.

Плазмидная ДНК міцно інтегрується в хромосомну ДНК рослинних клітин та викликає їх пухлинний зростання. Шляхом щеплення таких клітин можна передати пухлина здоровому рослині; в такий спосіб, коли клітини зазнали пухлинну трансформацію, бактерія і його плазмида стають вже непотрібними. Інтегрована ДНК плазміди відповідальна також здатність клітин виробляти нові ферменти, з допомогою яких синтезуються амінокислоти октопин і нопалин, звані опины. Ці амінокислоти можна використовувати бактерією A. tumefaciens як джерело вуглецю й азоту. Завдяки Ti-плазмиде Agrobacterium отримує, в такий спосіб, переважний доступом до продуктам фотосинтезу рослини: Ti-плазмида забезпечує освіту амінокислот, які можна засвоєно лише цієї бактерией.

Поруч із Ti-плазмида є природний генний вектор для перенесення чужорідної ДНК в рослини. Гени, що визначають пухлинний зростання, можна з плазміди і замінити іншими генами. З тканин, які перебувають з клітин, трансформованих видозміненій плазмидой, вдавалося регенерувати цілі рослини тютюну, які росли цілком нормально і ще й до всього синтезували опины. Отже, гени чужорідної ДНК передавалися як домінантні чинники відповідно до звичайними законами наследственности.

Пошуки шляхів запровадження чужорідних генів у клітини вищих рослин інтенсивно проходять у весь світ початку 1970-х років. Однією з імпульсів до розвитку методів перенесення чужорідних генів у рослини стали результати докладного вивчення молекулярно-генетичних основ пухлинного зростання рослин з участю бактерій роду Agrobacterium. У цих досліджень виявилося, що пухлинотворні плазмідами агробактерій, які становлять мини-кольцевые ДНК, є природної векторної системою, яку нині використовують із перенесення генів у рослини. Плазмида агробактерї переносить частину свого ДНК в ДНК рослинної клітини, в ДНК вбудовується «потрібний «ген. З допомогою цього унікального вектора отримано велика кількість трансгенних рослин. Важливо і те, що методи генної інженерії зараз використовують у практиці, це найважливіша методологія для пізнання фундаментальних основ організації та функціонування рослинного генома.

2.1. ЩО ТАКЕ ГЕНЕТИЧНА ІНЖЕНЕРІЯ РАСТЕНИЙ

Генетична інженерія — це система експериментальних прийомів, дозволяють конструювати штучні генетичні структури як так званих рекомбінантних (гібридних) молекул ДНК. Суть генетичної інженерії зводиться до переносу в рослини чужорідних генів, що потенційно можуть повідомляти рослинам корисні властивості. Такі маніпуляції здійснюються з допомогою відповідних ферментів — рестрикционных эндонуклеаз, расщепляющих молекули ДНК у суворо певних ділянках, і лигаз, сшивающих фрагменти на єдину рекомбинантную молекулу ДНК.

Отже, процедури генетичної інженерії зводяться до того що, що з набору фрагментів ДНК, містять потрібний ген, збирають гибридную структуру, що потім вводять у клітину. Запроваджена генетична інформація экспрессируется, що зумовлює синтезу нового продукту. Отже, вводячи у клітину нову генетичну інформацію як гібридних молекул ДНК, можна було одержати змінений организм.

Рослини мають дуже важливе перевагу над тваринами, саме можлива їх регенерація in vitro з недиференційованих соматичних тканин із отриманням нормальних, фертильных (здатних зав’язувати насіння) рослин. Це властивість (тотипотентність) відкриває для молекулярних біологів великі можливості у вивченні функціонування генів, уведених у рослини, і навіть використовують у селекції рослин. Для конструювання рослин вирішити такі: виділити конкретний ген, розробити методи, щоб забезпечити включення їх у спадковий апарат рослинної клітини, регенерувати з одиничних клітин нормальне рослина зі зміненим генотипом. Отже, методологія генетичної інженерії в відношенні рослин спрямовано корінну зміну методів традиційної селекції, аби бажані ознаки рослин можна було отримувати шляхом прямого запровадження них відповідних генів замість тривалої роботи з скрещиваниям.

Формальною датою народження генетичної інженерії рослин є отримане з допомогою Ti-плазмидного вектора перше химерное рослина санбин (sunbeen) як наслідок перенесення гена запасного білка бобових (фазеолина) в геном соняшнику (sunflower + been). Це було першим відчутним, хоча, можливо, і недосконалим свідченням те, що в відношенні рослин генетична інженерія зможе виправдати надії спеціалістів у галузі молекулярної генетики, біології і селекции.

2.2. КОРОНЧАТЫЕ ГАЛЛИ РАСТЕНИЙ

Серед опитаної ґрунтових бактерій, відомих під загальним назвою Agrobacteria, кілька видів, які можуть опинитися заражати рослин та викликати утворення пухлин, званих корончатыми галлами, що перебувають з недиференційованої пухлинної тканини, зростанням різниці у місці зараження. Клітини корончастих галлів у багатьох відносинах нагадують ракових клітин тварин. Вони набувають спроможність до необмеженому, нерегулируемому зростанню. Коли клітини корончастих галлів культивують in vitro, вони живуть при відсутності спеціальних гормонів, необхідних при культивуванні нормальних рослинних клітин. Понад те, клітини корончастих галлів продовжують зберігати ці якості (трансформований фенотип), навіть якщо вбити бактерії антибіотиками. Вивчення індуктора пухлин Agrobacterium tumefaciens показало, власне опухолеродным агентом в цій бактерії є Ti-плазмида, яка частково інтегрується в хромосоми растений.

2.3. АГРОБАКТЕРИАЛЬНАЯ ТРАНСФОРМАЦІЯ РОСЛИН: Ti-ПЛАЗМИДЫ

У A. tumefaciens крім хромосоми міститься Ti-плазмида. Плазмида містить Т-ДНК (transferred DNA), що становить 12−22 тис. пар підстав і вбудовується в ДНК рослинної хромосоми. Вона кодує ферменти синтезу фитогормонов і опинов — похідних амінокислот, які використовуються бактерією як джерело вуглецю, азоту та энергии.

Крім Т-ДНК в Ti-плазмиде містяться vir-область, відповідальна за перенесення Т-ДНК на рослину, гени утилізації опинов, і навіть локусы, контролюючі розмноження плазмідами в бактеріальної клітині і його перенесення при бактеріальної кон’югації. Докази те, що саме Ti-плазмиды, а чи не хромосомні гени бактерій відповідальні у підтриманні трансформованого стану клітин корончастих галлів, отримано щодо штамів Agrobacterium, містять мутантні Ti-плазмиды. Агробактерї, позбавлені Ti-плазмид, не індукують в зараженому рослині ані освіти корончастих галлів, ні синтезу опинов. Усі отримані мутації Ti-плазмид поділяють втричі основних класу. Мутанти першого класу не індукують синтез опинов, але викликають освіту корончастих галлів. Мутанти другого класу втрачають здатність індукувати розвиток пухлин. Мутанти третього класу лише стимулюють аномальную диференціювання нормальних клітин, наприклад надлишкове зростання коренів чи втеч. Ці генетичні засвідчили, що ДНК Ti-плазмид містить гени, які контролюють розвиток пухлин, синтез опинов. Оскільки в рослин з мутантними Ti-плазмидами другого і третього класів з допомогою фитогормонов можна стимулювати опухолеобразование, було припущено, що отримане мутації зачіпають гормональний метаболизм.

2.4. ЯКІ ГЕНИ ЛОКАЛІЗОВАНО У Т-ДНК

У сфері Т-ДНК картировано щонайменше шість генів, відповідальних за морфологію пухлини і синтез фитогормонов. Ген iaaM 1 кодує фермент триптофан-2-монооксигеназу, яка переводить триптофан в индолилацетамид. Ген iaaH 2 кодує гидролазу, що перетворює индолилацетамид в гормон рослин ауксин — индолил-3-уксусную кислоту (ІУК). Спільна діяльність продуктів генів 1 і 2 обумовлює появу у рослинах невластивого їм шляху освіти природного ауксина, у цілому призводить до зміни кількості ауксина у клітинах рослини. Изопентенилтрансфераза, кодируемая геном ipt, каталізує ранні стадії біосинтезу природного цитокинина. Гени iaaM, iaaH і ipt є онкогены, оскільки продуктами цих генів є фитогормоны ауксин і цитокинин, які індукують розподіл клітин. Ген 5 відпо-відає синтез индол-3-лактата, що є продуктом перетворення ауксина. Цей метаболіт виявляє антиауксиновый ефект. Ген tml 6 впливає величину пухлини; транскрипт 6-а необхідний секреції нопалина і октопина, а ген 6б змінює чутливість рослинних тканин до цитокинину і зберігає клітини в недиференційованому стані. Отже, чотири чи, можливо, п’ять генів придушують диференціювання пухлинних клітин та переводять в стан розподілу, та ще один ген кодує фермент, катализирующий синтез опинов.

2.5. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНІЗМИ АГРОБАКТЕРИАЛЬНОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ

Процес трансформації можна розділити чотирма етапу: прикріплення бактерії до стінки рослинної клітини, проникнення Т-ДНК всередину клітини рослини, інтеграція Т-ДНК в геном рослин та експресія Т-ДНК.

Індукція початкових етапів трансформації може відбуватися лише в місці раневого ушкодження рослини, де можна виділити низькомолекулярні фенольные сполуки (наприклад, ацетосирингон), вуглеводи (наприклад, глюкоза і глюкуроновая кислота) і утворюється кислий рН. Весь процес вирізання і інтеграції Т-ДНК в рослинну хромосому здійснюють продукти генів, локалізованих в vir-области. Сприйняття раневых сигналів здійснюють білки VirA і ChvE. ChvE, білок, кодируемый хромосомным геном бактерії, відчуває присутність ацетосирингона і змінює здатність VirA відповідати на фенольные сполуки. VirA є гистидиновой протеїнкіназою, здатної до аутофосфорилированию, він двічі пронизує внутрішню мембрану бактеріальної клітини, і виступає як донора фосфору білку VirG. Фосфорований VirG активує транскрипцію інших vir-генов. Індукція vir-генов оборотна, що дуже важливо задля патогена: у разі, якщо господар — хворий, і нежиттєздатний організм, перенесення Т-ДНК не осуществляется.

Оперон VirD кодує кілька продуктів. Одне з них двухкомпонентной эндонуклеазой. Область Т-ДНК оточена однаковими повторами довжиною 25 пар підстав. Ці послідовності є сайтами впізнавання VirD-эндонуклеазы, що краючою точно між 3-му і 4-му підставами 25 пар підстав повтору. Ця эндонуклеаза відповідальна за вирізання Т-ДНК. Бєлки VirB і VirE необхідні транспорту Т-ДНК з бактерії на рослину. Перенесення Т-ДНК з бактерії в цитоплазму рослинної клітини здійснюється за 30 мин.

Впровадження Т-ДНК в рослинний геном є багатоступеневим процесом. Недавні результати аналізу нуклеотидних послідовностей в ділянках рослинної ДНК, у яких инкорпорируется Т-ДНК, показали, що є гомология між рослинної ДНК по обидва боки від місця вбудовування і зовнішніми областями плазмидной ДНК агробактерій. У геном рослини можуть вбудовуватися кілька копій Т-ДНК. Після вбудови у хромосому Т-ДНК стає звичайній частиною геному рослини. Т-ДНК транскрибується в рослинних клітинах РНК-полимеразой II рослини- хазяїна. Транскрипти мають особливості эукариотических матриць. Сама бактерія у клітину не проникає, а залишається в межклеточном просторі і використовує рослинні клітини з умонтованим Т-ДНК як фабрику, продуцирующую опины — джерело азоту та углерода.

2.6. ДНК Ti-ПЛАЗМИДЫ МОЖНА ИСПОЛЬЗОВАТЬ У ЯКІСТЬ ВЕКТОРА

Т-ДНК Ti-плазмид має двома властивостями, що роблять її за суті ідеальним вектором запровадження чужорідних генів у клітини рослин. У- перших, коло господарів агробактерій вельми широке: вони трансформують клітини практично всіх двочасткових рослин. Відомо, що домогтися зараження однодольных, зокрема злаків. По-друге, інтегрованій у склад геному рослини Т-ДНК наслідується як простий домінантний ознаку на відповідно до законів Менделя, та її гени мають власні промотори (регуляторна область гена, визначальна час і важливе місце його експресії), під контролем яких можуть экспрессироваться вставлені у Т-ДНК чужорідні гены.

Найпростіший спосіб запровадження Т-ДНК у клітини рослини у тому, щоб заразити його A. tumefaciens, що містить підходящу Ti-плазмиду, і надати подальше природному ходу подій. Слід лише вміти вбудовувати потрібні гени в Т-сегмент ДНК плазміди. Проте розміри цілої Ti- плазміди значно більше розмірів молекул, зазвичай які у роботі з рекомбінантною ДНК. Щоб подолати цю труднощі, розроблений наступний підхід. Насамперед Т-сегмент вирізають з Ti-плазмиды з допомогою рестриктаз і убудовують одного з стандартних плазмидных векторів для розмноження в клітинах бактерій — Escherichia coli. E. сoli містить плазміду pBR322, що може до саморепликации, тобто розмноженню, приводящему до збільшення кількості її копій. Коли в плазміду pBR322 впровадили ділянку Ti-плазмиды, це рекомбінантна структура може потім реплицироваться багаторазово, що зумовлює збільшення кількості копій ділянок Ti-плазмиды. Цей процес відбувається називається клонуванням. Бактерії, містять плазміду pBR322 з ділянкою Т-ДНК, розмножують, після чого цю плазміду виділяють. Потім із використанням рестриктаз і стандартних прийомів роботи з рекомбінантною ДНК в Т-сегмент убудовують певний ген. Цей молекулярний гібрид, сьогодні вже у якому Т-ДНК з умонтованим у ній геном, знову розмножують в E. сoli, та був вводять у клітини A. tumefaciens, які мають відповідну повну Ti-плазмиду. Через війну обміну ідентичними ділянками (гомологичная рекомбінація) між Т-сегментами нативной і сконструйованої Ti-плазмид Т-ДНК з умонтованим чужорідних геном входить у Ti-плазмиду, заміщаючи нормальну Т-ДНК. Отже, ми отримуємо клітини A. tumefaciens, які мають Ti-плазмиду з умонтованим в Т- сегмент за потрібне геном. Останній етап залежить від зараження рослин цими модифікованими генно-інженерними методами агробактериями. Клітини отриманих трансгенних рослин міститимуть інтегровану Т-ДНК зі вбудованим чужорідних геном, тобто мета роботи, перебувала у запровадженні даного гена в геном рослини, буде досягнуто. Недавні дослідження, проте, показали, що цей процедуру можна спростити, якщо використовувати бінарні векторні системи, створення яких у тому, що агробактериальная клітина повинна містити по крайнього заходу дві різні модифіковані Ti-плазмиды. Один із них повинна містити лише vir- область, гени якій будуть брати участь у вирізанні Т-ДНК. Такі плазмідами називають плазмидами-помощницами. Друга Ti-плазмида повинна містити область Т-ДНК із потрібною вбудованим геном. Продукти vir-генов здатні вирізати Т-ДНК як у власної плазмиде, і на сусідньої, тобто vir- гени можуть працювати незалежно від своїх місцеположення. Отже, якщо клітини агробактерї містять Ti-плазмиду з сегментом vir і той плазміду з Т-ДНК, несучою вмонтований ген, ці бактерії можуть трансформувати клітини растений.

У цілому нині ідеальна векторна система з урахуванням Ti-плазмиды повинна: 1) утримувати все сигнали, необхідних перенесення й стабільного інтеграції в ядерну ДНК рослин; систему для експресії чужорідних генів у рослинах (впізнаваний рослинними полимеразами промотор), маркер, необхідний для селекції трансформованих клітин; 2) не утримувати онкогенів, тобто генів, які придушують диференціювання рослинних клітин. Другий пункт досягається з допомогою транспозонного мутагенезу (транспозон — послідовність ДНК, здатна переміщатися за геномом). Через війну запровадження транспозона в Т-ДНК можна вимкнути гени, що призводять до опухолеобразованию (iaaM, iaaH, ipt), що ні віддзеркалюється в механізмі перенесення Т-ДНК. Зазвичай використовують бактеріальні транспозони (Tn5, Tn7). При цьому знімається блок з процесів регенерації. При модифікації Ti-плазмиды слід передбачити також наявність унікальних сайтів рестрикції, в які буде клонирован чужорідний фрагмент ДНК. Такі унікальні сайти рестрикції створюються включенням до штучні Ti-конструкции послідовностей, які містять множинні сайти розрізування для рестриктаз EcoR1, Hind III, BamH1 та інших. У окремих у одному множині сайті є 18−20 сайтів, впізнаваних різними рестриктазами, чому ці ділянки і називаються полилинкерами.

З іншого боку, при конструюванні векторних молекул має бути передбачає наявності промоторів, що працюють у рослинах. Промотор (ділянку, якого приєднуються РНК-полімерази) повинен мати набором властивостей, саме: силою (активної експресією), можливістю регуляції, ткане- і органспецифической експресією. Приміром, до регульованим промоторам належить промотор генів білків теплового шоку (генів, активність яких индуцируется за підвищеної температурі), а тканеспецифичная експресія й у генів, контролюючих синтез запасних білків, наприклад зеина, який виявлений лише у тканинах насіння злаків. Найбільш популярний промотор гена вірусу мозаїки кольорової капусти (CAMV). Гени, підшиті до такого промотору, активно экспрессируются переважають у всіх тканях.

Нарешті, в векторі мають бути передбачені маркери, з допомогою яких може бути відбір трансгенних рослин. У літературі маркерні гени ще називають репортерными. Їх досить багато. Наприклад, luxA і luxB — це гени, виділені з ДНК світлячків. Вони контролюють синтез люциферазы, що забезпечує перехід люцефиринов з окисленої форми в основну, як і забезпечує світіння. Останнім часом популярна інший репортерный ген — pgfp, який контролює синтез GFP-белка (green fluorescent protein). Цей ген було виділено з ДНК медузи Acquorea victoria. Трансгенні рослини з цим геном світяться в ультрафіолеті зеленим светом.

Традиційний спосіб трансформації рослинних клітин із допомогою Т-ДНК залежить від заподіянні агробактерій, містять Ti-плазмиду, на спеціально ушкоджений втеча. Зараз використовують широкий арсенал методів щоб одержати трансгенних рослин. Створено навіть спеціальний прилад — «Shotgun », який стріляє дрібними вольфрамовыми кульками, одягненими в молекули ДНК, здійснюючи в такий спосіб трансформацію рослинних клеток.

2.7. ПРАКТИЧНЕ ЗАСТОСУВАННЯ ГЕНЕТИЧНОЇ ІНЖЕНЕРІЇ РОСЛИН С

ВИКОРИСТАННЯМ Ti-ПЛАЗМИД

Ще кілька років тому вчені запитували, чи можна створити сорти, збалансовані за складом амінокислот, стійкі до холоду, посухи, не поражаемые шкідниками. Сьогодні з упевненістю стверджувати, такі трансгенні вже вийшли у полі. По літературним даним, до 1997 року за 30 я країн світу проведено більше трьох тис. польових випробувань. У цих експериментах використовували трансгенні рослини 40 різних видів, які стосуються різним сімействам, включаючи злаки. Після успішних експериментів з’явилися побоювання щодо можливий шкоду генетичної інженерії природі і людства. Але вже за століття свого існування генетична інженерія не принесла шкоди ні природі, ні людині. Головне, у різноманітних експериментах з генної інженерії слід дотримуватися розроблені правила.

Найгостріше стоїть питання отриманні рослин, стійких до шкідників сільського господарства, оскільки хвороби рослин стали основним лимитирующим чинником отримання врожаю. У арсеналі генної інженерії рослин є багато прийомів, дозволяють отримати трансгенні рослини, стійкі до комах. Традиційно використовують ген bt, продуктом якого є бактеріальний токсин Bacillus thuringiensis. Ця тюрингская бактерія продукує великий білок (протоксин), контрольований геном bt, який, потрапляючи в кишечник личинок комах, руйнується під впливом ферментів, яке фрагмент (эндотоксин) призводить до їхнього загибелі. На приведено схема конструювання вектора й отримання трансгенних рослин бавовни, які мають ознака опірності комахою. Нині вже синтезовано штучний ген bt, конструкція з яким ефективніша, не бажаючи трансгенні рослини мають широкий спектр опірності комахою. Трансгенні рослини картоплі, бавовни, кукурудзи з геном bt вже виробляються фірмами «Monsanto », «Ciba Seeds «і продаються на ринках світу, хоча дискусії про їхнє використання ще закончены.

Відомо, що рослини, як і і домашні тварини, здатні виробляти імунітет. Цим дивовижну властивість мають лише стійкі рослини, які мають при атаці патогенів сильно змінюється метаболізм. Наприклад, у стійких рослин накопичуються такі хімічні сполуки, як перекис водню (Н2О2), саліцилова кислота (SA), фитоалексины (сполуки, виконують захисну функцію в рослині). Підвищена цих сполук сприяє протистояння рослини боротьби з патогенами. Ось одна з прикладів, доводить роль саліцилової кислоти в імунному відповіді рослин. Трансгенні рослини тютюну, які містять бактеріальний ген, контролюючий синтез саліцилат гидролазы (цей фермент руйнує SA), були нездатні до імунної відповіді. Тому зміна генно- інженерним шляхом рівня саліцилової кислоти чи вироблення в рослинах в у відповідь патоген H2O2 то, можливо перспективним до створення стійких трансгенних растений.

Останніми роками вчені використовують новий підхід щоб одержати трансгенних рослин з «antisense RNA «(перевернутої чи антисмысловой РНК), що дозволяє управляти роботою интересуемого гена. І тут при конструюванні вектора копію ДНК (к-ДНК) встраиваемого гена перевертають на 180?. У результаті трансгенном рослині утворюється нормальна молекула мРНК і перегорнута, яка через комплементарності нормальної мРНК утворює із нею комплекс і закодований білок не синтезується. Такий їхній підхід використаний отримання трансгенних рослин томатів з поліпшеним якістю плодів. Вектор включав к-ДНК гена PG, контролюючого синтез полигалактуроназы (polygalacturonase) — ферменту, що у руйнуванні пектину, основного компонента міжклітинного простору рослинних тканин. Продукт гена PG синтезується під час дозрівання плодів томатів, а збільшення його кількості призводить до того, що томати стають м’якшими, значно скорочує термін їхньої зберігання. Відключення цього гена в трансгенах дозволило отримати рослини томатів з новими властивостями плодів, що значно довше зберігалися, а й рослини були стійкі до грибною захворювань. Той самий підхід можна застосувати для регулювання термінів дозрівання томатів, а як мішень у разі використовують ген EFE (ethylene-forming enzyme), продуктом якого є фермент, що бере участь в біосинтезі етилену. Етилен — це газоподібний гормон, функції якого є контролю над процесом дозрівання плодов.

Отже, стратегія антисмысловых конструкцій широко застосовна для модифікації експресії генів. Ця стратегія використовується як для отримання рослин з новими якостями, але й фундаментальних досліджень, у генетиці растений.

Варто згадати ще про один напрямі, у генної інженерії рослин, яке донедавна переважно використовували у фундаментальних дослідженнях — вивчення ролі гормонів у розвитку рослин. Суть експериментів полягала у отриманні трансгенних рослин з комбінацією певних бактеріальних гормональних генів, наприклад лише iaaM чи ipt тощо. Ці експерименти зробили внесок як свідчення ролі ауксинов і цитокининов в дифференцировке растений.

Останніми роками цей підхід використовують в практичної селекції. Виявилося, що плоди трансгенних рослин з геном iaaM, що під промотором гена Def (ген, який экспрессируется лише у плодах), є партенокарпическими, тобто сформованими без запилення. Партенокарпические плоди характеризуються або в повній відсутності насіння, або дуже малим їх кількістю, що дозволяє покінчити з проблемою «зайвих кісточок », наприклад, у арбузе, цитрусових тощо. Вже отримані трансгенні рослини кабачків, які разом немає від контрольних, але не містять семян.

Залишається додати кілька слів ще про один аспекті можливостей використання Ti-плазмиды агробактерї. Обеззброєну, позбавлену онкогенів Ti-плазмиду вчені активно використовують із отримання мутацій. Цей метод називається Т-ДНК-инсерционного мутагенезу. Т-ДНК, вбудовуючись в геном рослини, виключає ген, у який вона встроилась, а, по втрати функції можна легко відбирати мутанти. Цей метод чудовий також тим, що дозволяє відразу знайти й клонувати відповідний ген. У цей час у такий спосіб отримано багато нових мутацій рослин i відповідні гени клоновані. У нашій лабораторії М. А. Раменской на основі Т-ДНК мутагенезу отримані рослини томатів з неспецифічної сталістю до фитофторозу.

Областей застосування трансгенних рослин дуже багато, що наявні відомості неможливо викласти у межах однієї статті. На рівні лабораторних експериментів роботи з отриманню рослин, стійких до холоду, важкими металами, підвищеному змісту солей та інших. Трансгенні рослини, стійкі гербіцидам (хімічним сполукам, що використовують для боротьби з бур’янами), до вірусів, рослини з підвищеним змістом олій і незамінних амінокислот вже вирощують на мільйонах гектарів. Так само цікавий і той аспект робіт — отримані трансгенні рослини з зміненими декоративними властивостями. Одне з прикладів — це отримання рослин петунії з різнобарвними квітками. На черги блакитні троянди з геном, контролюючим синтез блакитного пігменту, клонованим з дельфиниума.

Отже, багато надії вже нині перетворилися на звершення, а агробактерия з її дивовижною Ti-плазмидой до рук учених став справжнім інструментом як пізнання функціонування рослинного геному, і на вирішення багатьох проблем, які перебувають перед сільське господарство. До жалю, нашій країні трансгенні рослини досі залишаються лише на рівні лабораторних експериментів, оскільки дорога від лабораторії до поля, як і багато років тому, залишається непротоптанной, тоді як у багатьох лабораторіях, у цьому однині і з нашого, вже сьогодні існують трансгенні рослини, які чекають на свого часа.

2. Онкогенез, викликаний у тварин ДНК-вирусами.

Дослідження канцерогенезу у тварин нерідко проводяться на культурах тканин. Якщо перенести клітини тварин, приміром, із органів курей чи хом’ячків, чи фибробласты людини у підходящу сприятливе середовище, то, на внутрішньої стінці культурального судини вони почнуть розмножуватися. Зазвичай клітини зростають лише до того часу, доки почнуть стикатися між собою. Через контактного гальмування утворюється лише одношаровий клітинний газон. Якщо ці нормальні клітини інфікувати опухолеродным вірусом, то контактне гальмування знімається, клітини продовжують розмножуватися і починають насуватися друг на друга. Багатошаровий зростання спостерігається тільки в клітин, претерпевших пухлинну трансформацію. З клітинної маси легко виділити окремі клітини, і у такий спосіб отримати чисті лінії (клони) трансформованих клеток.

Віруси полиомы і SV40 («Мавпячий вірус 40 ») ставляться до групи паповирусов. Вони містять двухцепочечные кільцеві молекули ДНК. У експерименті вірус можна перенести для розмноження у клітини тканинної культури. Розмножуючись у деяких (про пермиссивных) клітинах, вірус викликає їх лизис, і в міру його розмноження клітини гинуть. За інших (непермессивных) клітинах вірус поводиться інакше. І тут розмноження вірусу придушується, і у одній з 105 клітин вірусна ДНК інтегрується в клітинну ДНК. Таке включення вірусної ДНК в геном клітини- хазяїна може спричинить пухлинної трансформації. У трансформованої клітині утворюється білок (Т-антиген), який запускається репликацию клітинної ДНК, і цього починається розмноження клітин. Ін'єкція що така трансформованих клітин животым призводить до швидкого освіті опухолей.

Онкогенез, викликаний у тварин РНК-вирусами.

До освіти пухлин у тварин може бути причетні ще й РНК- віруси — ретровіруси. Вони ставляться до икосаэдрическим вірусам з оболонкою і містять (+)РНК-геном (одноцепочечную РНК). Як онкогенных вірусів вони, наприклад, викликають саркому Рауса і курей і лейкемію у мишей. Назва «ретровіруси «пов'язана з тим, що їх розмноженні бере участь зворотна транскриптаза. РНК цих вірусів неспроможна відтворюватися шляхом простий реплікації - необхідна її попередня транскрипція в ДНК із наступною інтеграцією цієї ДНК до однієї їх хромосом клетки-хозяина. Інтеграція — необхідний етап репродукції вірусу; лише інтегрована вірусна ДНК буде транскрибуватися. Оскільки інтеграція в клітинну ДНК входить у життєвий цикл вірусу, частота інтеграції дуже великий. Мабуть, вірусна ДНК може входитимуть у клітинну у кожному месте.

Розмноження вірусу не призводить до лизису клітини. Нуклеокапсид утворюється внтури клітини, переміщається потім до плазматичної мембрані і виходить назовні, одягнений у оболонку з цього мембрани. Інтегрована ДНК ретровируса реплицируется разом із геномом клетки-хозяина і тому міститься у кожної клітині пухлини (саркоми). Пухлинний зростання клітин обумовлений експресією вірусного гена «src «. Цей ген кодує білок, який очевидно, є киназу, фосфорилирующую білки. Можна думати, що ця киназа бере участь у перетворення диференційованої клітини у клітину ембріонального типа.

Нещодавно вияснена послідовність підстав в вірусної РНК. Виявилося, що вона подібна в послідовністю однієї з генів людини. Звідси можна зрозуміти, що src — це ген тваринного походження, який внаслідок неточною транскрипції було включено в РНК вірусу разом із вірусними генами і закріпився у ній. Це міг стати ген, який кодує важливий для ембріональної клітини чинник економічного зростання. Отже, пухлини, викликані ретровирусами, зрештою обумовлені перенесенням якогось гена тваринного походження на клітину животного.

" Рак викликається вірусами «. Це колись божевільна ідея Л. А. Зільбера высказанна в середині 1930-х. Те, що віруси можуть викликати пухлини у мишей, у пацюків, у курей — доведено. Але до чого тут людина? Загадка походження раку хвилювала вчених із того часу, як медики навчилися розпізнавати це захворювання. Що викликає злоякісне переродження клітин, стрімкий лавиноподібний їх зростання, коли, вторгаючись в здорові тканини і органи, вони душать, обплутують, вбивають все живое? В початку ХХ століття з’ясувалося, що рак може виникнути під впливом різних хімічних речовин, їх почали називати канцерогенами. Ртуть і миш’як, дим сигарети — і анілінові барвники, кам’яновугільна смола і мінеральні олії, друкарський фарба і азбест… Інколи здається, що лише жменьці людей якимось дивом вдається вижити у тому канцерогенном океане.

Отже, злива, потік, потоп канцерогенів. Можливо, і генетичний рок: є такі, яким визначено захворіти на рак, це закладено у них спадково, генетически?

Пішов у історію XIX століття з його блискучими відкриттями в мікробіології, закінчився, й ХХ, разом із другим тисячоліттям, з лавиною відкриттів переважають у всіх областях науку й техніки. Проте віз і нині там. До цього часу про причини розвитку раку (по науковому — етіології), досі нічого невідомо. Звісно, знаємо, що може служити чинником ризику, але чому і в кого завтра розвинеться пухлина — ніхто сказати, на жаль, доки може. Людина знайшла збудників багатьох страшних хвороб. Ще наприкінці ХIX століття Д. І. Івановський відкрив світ вірусів, а початку ХХ століття одне із перших вірусологів Європи А. Боррель вперше у друку висловив гіпотезу: а не фильтрующиеся чи віруси викликають злоякісні опухоли?

Невдовзі У. Эллерман і Про. Банг повідомляють, що лейкози у курей справді може мати вірусне походження. І готові експериментально підтвердити це… Втім, тоді лейкози не зараховували ще до злоякісним новоутворенням, тож питання начебто цілком неясний. Неясний для всіх, крім… І. І. Мечникова. Ще 1910 року це великий провидець науки друкує з газети «Російське слово «статтю, у якій пише буквально таке: «Одна причина раку, безумовно, перебуває в організмі, але інша потрапляє у нього у вигляді екзогенного початку, швидше за все — вірусу ».

Минає лише рік, і ветеринарний лікар П. Раус представляє докази вірусної природи щільною (інакше, солідної) пухлини курей, так званої саркоми Рауса. Це відкриття було зроблено на 1911 року, а Нобелівську премію для неї присуджували Раусу через… півстоліття. Щастя, що він встиг дожити до свого триумфа!

Між відкриттям та її визнанням (та використанням) дуже часто лежать «дистанції надто велика «. Пригадаємо, що Р. Менделя були не оцінені сучасниками по суті переоткрыты наново через 50 років, якщо їх творця не було серед живих. Вірус поліомієліту відкрив До. Ландштейнер у Відні 1909 року, а ефективна вакцина проти страшного захворювання світ лише у 50-ті роки. Вірус грипу вперше виділено від чоловіка До. Эндрюсом в 1933 року, ефективних гриппозных вакцин немає досі, тож якусь-там Нобелівської премією за розв’язання проблеми грипу, так би мовити, і пахне. Отож Раус — щасливий человек!

Втім, повернемося на початок сучасності. Мелькнувшая у роки на роботах А. Борреля, І. І. Мечникова, У. Эллермана, Про. Банга, П. Рауса думка про вірусної природі раку, думку, значною мірою підказана полюванням за вірусами, згасла на цілу чверть века.

У насправді, було відкрито хвороботворними вірусами, викликають віспу, кір, грип, свинку, жовту лихоманку, але, де він, вірус раку людини, і якщо є, чому його ніхто не зміг наздогнати і увидеть?

… 14 грудня 1935 року. Всесоюзне нарада щодо вивченню ультрамикробов і фильтрующихся вирусов.

На трибуні - Зільбер. Радянська вірусологія народжується. І тільки він із пристрасних її піонерів, творець першої спеціалізованої вірусологічної лабораторії Наркомату охорони здоров’я РРФСР. Вчений ж розпочинає з загальновизнаних аргументов:

" Є думка, що фильтрующиеся віруси рідко вражають людини. Однак це, зовсім не так. Якщо ми підрахуємо захворюваність… то одержимо, що… з 1929 по 1934 рік… грипом, на кір, на поліомієліт і віспою занедужали 25 142 650 людина, тоді як основними бактерійними інфекціями — 4 072 446 людина ".

Отже, у необхідності вивчення вірусів, здається, не приходится.

Але… І далі Зільбер заговорив у тому, що ні могло б не викликати глибокої і настороженої тиші зала:

" … Необхідно зупинитися на успіхи у сфері вивчення етіології деяких злоякісних пухлин. Я чудово розумію необхідність надзвичайної стриманості та глибокої обережності у цьому складному і важливому питанні. Проте неможливо замовчати роботи останнього часу, у яких висловлюється принципово новий погляд з цього складну проблему… Чи дозволено думати, що чинник, викликає деякі пухлини ссавців, не самої клітиною цієї пухлини, а екзогенним, автономним від нього агентом, що у деяких випадках, проте, настільки тісно пов’язаний із нею, і що може бути відділений від нього фільтруванням… Пройти повз цих фактів неможливо… «

Настороженість залу змінилася здивуванням, подив вирішилося нерозумінням. Добре, якщо чемним, без усмішок і іронічних вигуків… Занадто багатьом, на відміну Зільбера, ці факти видалися не що стоять уваги, повз них можна було пройти… Та й хіба факти? Пухлини мишей, пацюків і кроликів, викликані штучно в эксперименте?

І все-таки історичні слова теж сказав: " … чинник, викликає деякі пухлини Млеко що живлять, є… агентом, автономним від клітини, який… проте, настільки тісно пов’язаний із нею, що ні то, можливо відділений від нього фільтруванням «. Слово вірус що немає, але це й лише вона має стояти тут, поруч з іншими: «може бути відділений від нього (клітини) фільтруванням «. Це що більше натяк, ніж висновок, але хоч віщий намек!

Моцарт казав про «миті, коли відразу чуєш всю ще написану симфонію «. Ніхто не вірить у неї, крім самого автора, бо лише авторський слух готовий сприйняти звучить майбутнє. І тому необхідний особливий провидницький слух. Зільбер мав таким слухом. І шумне несхвалення опонентів були його притупить.

" Нелегко, — пише учень і послідовник Зільбера член-кореспондент АН СРСР професор Р. І. Абелев, — постійно бути, у опозиції загальноприйнятим думок. Те, що з нього були ясним і навіть очевидним… зовсім на уявлялося таким більшості дослідників… Факти, наведені Львом Олександровичем, як вагомі докази на користь своєї погляду, які завжди звучали їм однозначно… І тут над байдужості чи консерватизмі. Річ у різному складі потужні мізки і у різних підходах до проблемі «.

… 1935 рік… Можливо, занадто передчасні ідеї Зільбера? Але усе ж, стосовно вірусів — збудників гострих інфекцій, — слухається зі увагою і гострим інтересом. І лише міркування щодо фильтрующемся агента пухлин, який «може бути відділений від клітини фільтруванням », падають на кам’янисту грунт… Отже, рано?

Божевільна ідея про вірусної природі раку чи, по крайнього заходу, для її видів підкріплюється і здогадками інших учених. М. Ф. Гамалея ще раніше включилися висловлював ідеї у тому, що може існувати віруси, розмножуються у клітинних ядрах. Адже є паразити, які розмножуються в ядрах туфелек-инфузорий. У цьому туфельки гибнут…

Аналогія ще доказ, розмірковував Зільбер. Але досліди у пошуках агента, не отделяющегося від клітини фільтруванням, захоплюють його повністю, безмежно, самоотверженно.

" Киньте усе й займіться цим! «

Досліди, сотні, тисячі опытов…

У доповіді, зробленому листопаді 1944 року в конференції Центрального онкологічного інституту, Зільбер вже зміг впевнено заявити: «Фільтрати молодих, хіба що що виникли пухлин… виявлялися здатними викликати злоякісний зростання. Гіпотетичний экстрацеллюлярный, внесений у клітину ззовні збудник злоякісного зростання став реальним агентом, доступним з вивчення ».

З 1944 року справді було кинуто усе й Зільбер відносини із своїми працівниками та учнями зайнявся лише вірусної теорією походження пухлин. За 22 року (в 1966 року серце Зільбера перестало битися) були пророблені десятки тисяч дослідів, написані сотні статей, зроблено десятки доповідей, видано унікальні монографії. За день на смерть учений дописав свою останню, одинадцяту (!) книжку, называвшуюся «Вирусогенетическая теорія виникнення пухлин ».

Але… історія ще договорена і нині - ні історія наукового подвигу Л. А. Зільбера, ні історія розкриття таємниці рака…

Барельєф Зільбера прикрашає нині стіну конференц-залу інституту вірусології у Москві. Але тут профілі Дженнера, Мечникова, Пастера, Ивановского…

У розвитку вчення про вірусному походження злоякісних новоутворень можна назвати ряд етапів, кожен із яких характеризується власним «коефіцієнтом «співвідношення емпіричних і теоретичних компонентов.

У I період (1903−1910 роки) явно переважали теоретичні, точніше умоглядні, елементи, оскільки вірусний онкогенез як такої був невідомий, й ролі вірусів у походження злоякісних новоутворень лише передбачалася (Боррель, Мечников).

II період (1910−1944 роки) характеризується переважанням емпіричних моментів, оскільки саме у цей час було відкрито специфічні опухолеродные віруси курей, мишей та інших животных.

Своєрідність III періоду (1944−1968 роки) пов’язано із розвитком і твердженням вирусогенетической концепції Зільбера про походження злоякісних новоутворень. Наріжним каменем стало положення про тому, що опухолеродные віруси є не інфекційні, а інтеграційні агенти. Правомірність цю концепцію було доведено спочатку для ДНК-содержащих онкогенных вірусів (Л. А. Зільбер, Р. Далбекко), та був й у РНК-содержащих онкогенных вірусів (Р. Темін). На термінах і поняттях інфекційний вірус і інтеграційний вірус слід зупинитися подробнее.

Інфекційний вирус-возбудитель інфекції - завжди вирулентен. Отруйний вірус. Власне, це олія масляна. Вірус і отруйний — слова одного кореня. Вірус — отрута, отруйний -отрутний. Отруйний вірус — отрутний отрута. Проте, прикметник отруйний містить у собі важливий і неоднозначний сенс стосовно іменнику вирус.

По-перше, цим терміном визначають збудників гострих вірусних інфекцій, тобто захворювань з коротким инкубационным періодом, бурхливим перебігом і щодо швидким фіналом: лікуванням, залишковими необоротними явищами чи загибеллю. Такі грип, поліомієліт, кір, паротит (свинка), вірусні енцефаліти, мозаїчна хвороба тютюну тощо. буд. і т. п.

Власне, народження вірусології як дисципліни сталося завдяки лише вирулентным вірусам. Мільйонні збитки змусили власників тютюнових плантацій звернутися до Д. І. Іванівському. Тисячі покалічених дитячих тіл «підганяли «вірусологів в усіх країнах у тому полюванні на вірус поліомієліту… Нині така ж хочеться ведеться на збудника СПИДа…

Тут зробимо важливе додавання: якщо інфекційний вірус послабити чи вбити, вийде вакцина, отже інфекційний вірус може бути не вирулентным, точніше — авирулентным…

Отруйний вірус, вторгаючись у клітину, підкоряє її, змушує працювати він, штампувати дедалі нові копії, виснажує клітку та, розграбувавши її, створивши полчища масі собі подібних, знищує клетку…

Так протікає гостра вірусна інфекція, викликана вирулентными вирусами.

Основний наукової заслугою Зільбера є з’ясування принципово нового становища, відповідно до якому крім вирулентных вірусів є ще якісно які від них — помірні (так називали їхню від початку, по аналогії з поміркованими фагами) чи інтеграційні віруси. Ці агенти викликають освіту принципово іншого комплексу вирус-клетка, в якому розгортається об'єднання, інтеграція геномів мікроорганізму і клітини- хозяина.

Геном — невідь що чітке поняття. Саме тому генетики його, як правило, не вживають. Вірусологів дно влаштовує, хоча зміст цього терміна цілком генетичний. Два геному лише у системі це що означає: два різних хранителя спадкової інформацією клітині (ДНК клітини, і ДНК чи РНК вірусу), два самостійних механізму транскрипції цієї інформації (то є окремі інформаційні РНК клітини, і вірусу), два самостійних механізму реплікації (множення) нуклеїнових кислот — клітини, і вірусу, два окремих процесу трансляції білків в рибосомах, що роблять і клітинні і вірусні белки.

Два геному і ще дві різні долі. Вірус триває в прийдешнім, клітина найчастіше вбита і гине. Геном вірусу перемагає над геномом клітини, саме на листі тютюну з’являються іржаві плями, саме тому віспинами пориті особи перехворілих віспою людей, саме тому тяжкими параличами відзначений поліомієліт: гинуть нервові клітини спинного мозку. Так буває при взаємодії вирулентного вірусу із відчутної клітиною. А що відбувається при інтеграції геномів і це таке вообще?

У 1935 року для Зільбера це було лише стан вірусу, що його тісно пов’язані з клітиною, і що може бути відділений від нього фільтруванням. Пізніше мова стала йти не про вірус загалом, лише про його нуклеїнової кислоті. Зрозуміло, що могло статися, коли роль нуклеїнових кислот в спадковості стала наповнюватися сучасним змістом. Вірусологи зіграли цьому найважливішому для для всієї біології подію видатну роль.

Ще 1952 року американські дослідники А. Херши і М. Чейз вивчали взаємодії вируса-бактериофага Т2 і кишковій палички, мітячи радіоактивної міткою або білок, або нуклеїнову кислоту вірусу. Досліди незмінно переконували, що у клітину кишкової палички проникає переважно ДНК бактериофага, саме він відповідальна за поява нових вірусних частинок. Майте на увазі, відбувається лише 1952 рік! Вотсон і Крік ще б’ються над розгадкою структури ДНК. Про роль вірусних нуклеїнових кислот тоді взагалі до пуття щось знали…

І раптом… у тому, щоб відбулося зараження клітини, і почалася хворобу і бурхливе поява нових вірусів, зовсім необов’язково наявність незбираного вірусу, варто лише його нуклеїнової кислоти. За кілька років це був блискуче підтверджено А. Гирером і Р. Шраммом до ФРН і X. Френкель-Конратом США. З вірусів мозаїчної хвороби тютюну вдалося виділити нуклеїнову кислоту, і її одна, лише вона, викликала хворобу і руйнація клітин. Відкриття 1956−1957 роках інфекційності деяких вірусних нуклеїнових кислот виявилося дуже важливою віхою історія вирусологии.

Невдовзі встановили, що інфекційні процеси, викликані нуклеїновими кислотами і цільним вірусами, істотно відрізняється, хоча ці відмінності мали дуже своєрідний характер. При зараження нуклеїновими кислотами прихований період хвороби скорочувався на третину, хоча пояснити — чому, ніхто доки може. Припущення, що прискорена репродукція пов’язані з відсутністю необхідності «роздягатися », неспроможна вважатися задовільним, оскільки треба «роздягатися «лише микропопуляции вірусу, що викликала інфікування. Але це кілька тисяч чи сотень тисяч вирионов погоди роблять, їх замало, захворювання викликають їх наступні генерації, представлені вже повноцінним, цілком «одягненим «вирусом.

Відрізняються та інших реакцію цілісний вірус і голу нуклеїнову кислоту. Приміром, антитіла діють лише з вірус, а ось фермент рибонуклеаза, навпаки, лише з вірусну РНК. Але ще важливіше підкреслити вкотре: відмінності носили непринциповий характер.

Отже, до початку шістдесятих років ясно, що молекули РНК вірусу тютюнової мозаїки, поліомієліту, енцефаліту та інших мають самостійної інфекційної активністю. Виявилося, що кордони живого може бути відсунуті навіть до вірусів, а до вірусним нуклеиновым кислотам.

Але якщо така, неминуче стали нові запитання: чи його вірусна нуклеїнова кислота — єдиний носій інфекційних властивостей вірусу, здатний здійснювати зараження й без участі білка, чи білок однак у природних умовах якось бере участь у? Одна річ — у пробірці, in votro, інше — в жизни.

Бурхливі, запеклі дискусії вірусологів нагадували часом арени філософів. У 1962 року в конференції у Інституті вірусології імені Д. І. Іванівського всерйоз обговорювали, що й чого неспроможна зробити гола вірусна нуклеїнова кислота, завжди чи іноді грає свою дивовижну роль та яка ця роль…

Дві погляду зіштовхнулися на конференції - Л. А. Зільбера й О. А. Смородинцева.

На думку Зільбера, саме нуклеїнова кислота вірусів сприяє виникненню стійких змін спадковості клітин та різноманітних хворобливих, патологічних процесів. Він завжди казав: «Виявилося можливим, наприклад, перетворити нетоксикогенный (неядовитый) штам дифтерійного мікроба в токсигенный (отрутний), інфікувавши його фагом, виділеним з токсикогенного штами. Нуклеїнова кислота фага, що є його генетичним елементом, інтегрується (об'єднується) з геномом бактерийной клітини, змінюючи його властивості і роблячи резистентной (стійкою. — Д. Р., В. З.) до повторному впливу фага ».

Та чи може внесення додаткової генетичної інформації викликати зміни у тварин клітинах? Деякі факти змушують думати, що коло інтеграційних захворювань ширший. Уявлення про пухлинах як інтеграційних захворюваннях відкриває нові аспекти вивчення їх патогенезу, профілактики і лікування. «Попри гипотетичность деяких суджень, — сказав Зільбер у фіналі, — наведене засновані на точних фактах… І це стане стимулом до широкої розгортання досліджень, у нові напрями ».

А. А. Смородинцев заперечував проти прагнення будувати вірусні нуклеїнові кислоти до рангу абсолютно самостійних інфекційних агентів, здатних виходити з заражених клітин та циркулювати в організмі ролі повноцінних збудників. На його думку, «участь нуклеїнових кислот у явищах репродукції вірусів це не дає підстав до переоцінці їх роль природному розвитку гострих інфекційних процесів, обумовлених участю зрілих вірусних частинок, здатних повноцінно поринути у чутливі клітини, і диференціювати чутливі і резистентні тканини ».

Забігаючи наперед, скажімо, що мають рацію були обидва, кожен по-своєму. Через кілька років вони дали точніші формулювання, враховують думки опонентів. Зільбер підкреслив, що «гостра вірусна інфекція не належить до «інтеграційним хворобам », а Смородинцев погодилася з тим, що «роль вірусних нуклеїнових кислот то, можливо враховано як суттєвого чи навіть головний чинник розвитку вірусних пухлин… «

Це зближення крайніх точок зору пояснювалося накопиченням величезного кількості нових фактів про особливості різних вірусів. Виявилося, що у одних випадках нуклеїнова кислота вірусу справді індукує гострий процес, руйнація клітин. Це нуклеїнова кислота інфекційних (вирулентных) вірусів, за іншими — вона інтегрується з клітинним геномом. Такі нуклеїнові кислоти «поміркованих «фагов, це було відомо. Але такий процес відбутися при взаємодії вірусів і клітин вищих тварин і звинувачують человека?

… 1964 рік. Москва. Вчені, присутні з усіх куточків планети, відзначали століття з дні народження Д. І. Іванівського. Доповідь Л. А. Зільбера носив дивне назва: «Неінфекційні віруси „. До цієї незвичайної групі вірусів він відніс все ДНК-содержащие онкогенні віруси. Вчений сказав тоді ось що: “ … вважатимуться доведеним, що механізм їхні діяння на клітину залежить від основному інтеграції їх нуклеїнової кислоти з геномом клітини, завдяки чому клітині виникають спадкові зміни, які виведуть клітину з підпорядкування системам, регулюючим клітинний зростання ».

" Те, що у вас є у вигляді, — палко заперечував професор У. Л. Рижков, — є гібридизація на молекулярному рівні. Але гібрид між людиною і вірусом немислимий, це абракадабра, з погляду генетика! ".

Минуло кілька років, і інтеграція геномів вірусу і клітини отримала чітке експериментальне підтвердження. На щастя, справа зрушила іще за життя Зільбера, у середині 1960-х років, було доведено на моделі паповавирусов.

Дивна назва «папова «створено із перших складів назв ДНК- містять онкогенных вірусів папіломи, полиомы, вакулиолизирующего вірусу (ПАНОВА).

Саме тоді було встановлено, що ДНК паповавирусов справді вбудовується (інтегрує) в ДНК хромосом клітинних ядер. У цьому вона втрачає здатність самостійно подвоюватись і навіть життя новим вірусам. Відтепер вона реплицируется лише разом із хромосомою клетки-хозяина! І це означає інтеграцію двох геномів: онкогенного вірусу і клетки-хозяина. Це і запідозрив Зільбер за який чимало років доти, як це було фактично виявлено. Саме і прихована базис вирусогенетической концепції походження злоякісних опухолей.

Концепція, підкріплена безліччю фактів і дослідів, стала теорією. Ми викладемо саму її суть, неминуче короткий і упрощенно.

Отже, ДНК вірусу об'єдналася з ДНК клітини, відтепер вони взаємно впливають друг на друга. Клітинна ДНК придушує (репресує) ті частини вірусного геному, яка завідує синтезом структурних вірусних білків і без зміни ті частини, що відповідає за синтез ранніх білків. Тому виробляються дедалі нові ранні білки, а структурні вірусні білки клітина взагалі продуцирует.

Роль ранніх білків у тому, щоб забезпечити безупинне конвеєрне виробництво серцевини вірусу — вірусної нуклеїнової кислоти. У драмі «отруйний вирус-клетка «ранні білки успішно грають цією роллю, забезпечуючи швидку напрацювання багатьох молекул вірусної РНК (чи ДНК) по «кресленню «однієї яка проникла молекулы.

У драмі «помірний (інтеграційний) вирус-клетка «дію розгортається істотно інакше. Нуклеїнові кислоти вірусу і клітини об'єдналися, але ранні білки намагаються зіграти своє звичайне роль. Для подвоєння (реплікації) ДНК необхідна за цілому участь 10 різних ферментів. Але геном паповавирусов може викликати синтез всього 6 білків. І щоб ранні білки все-таки виконали свій головний місію, необхідно активізувати діяльність клітинних ферментів, що у синтезі клітинної ДНК, поставивши їх у службу вирусам.

Але у об'єднанні геномів вірусу і клітини ферменти не працюють, синтез структурних вірусних білків заторможено клітиною; відбувається лише синтез ранніх білків, він іде безперервно, постійно. У цьому постійно подвоюється і ДНК клітини, у якому сидить ДНК вірусу, що спонукає клітину до невпинному клітинному діленню. Отже: ранні білки «підштовхують «клітину до передчасному діленню, кожне новий розподіл призводить до новому синтезу ранніх білків, інші ж знову… Порочне коло замкнулося. Вірусна нуклеїнова кислота, як батіг, поганяє клітинне розмноження, що виходить з- під регулюючих впливів організму. Автономно і постійно діляться клітини набувають ціле пасмо нових властивостей, втрачаючи у своїй нормальний образ, стаючи особисто безсмертними і несучи у своїй загибель организму…

Повторюємо, фактичне доказ інтеграції ДНК паповавирусов, передусім вакуолизирующего вірусу (з так званого ОВ40- «0 «-мавпячого) отримано за життя Зільбера у його лабораторії й у лабораторії видатного американського вирусолога Р. Далбекко. Але питання, є чи механізм інтеграції обов’язковим й у РНК-содержащих онкогенных вірусів, залишався до 1966 року открытым.

Справді, як і уявити інтеграцію вірусної РНК в клітинну ДНК? Молекулярна біологія таких механізмів не знає. Адже РНК- містять онкогенні віруси вельми багато і значні. Досить нагадати, що до їх числа належить знаменитий вірус курячої саркоми, про відкритті якого П. Раусом в 1911 році ми говорили від початку цієї главы.

Вірус саркоми Рауса був старанно вивчений до лабораторій Зільбера. Було встановлено, що вірус цей може долати видовий бар'єр і викликати пухлини у ссавців — пацюків і морських свинок. Про це відкриття Л. А. Зільбер і Р. Я. Свет-Молдавский, І. М. Крюкова й О. З. Скорикова були визнані гідними Державної премії СРСР. Але як РНК цього онкологічного «чемпіона «може інтегрувати в клітинну ДНК, залишалося незрозумілим. У вирусогенетической концепції походження раку зяяла велика брешь-Правда, ще 1964 року зовсім молодий тоді учень Р. Далбекко, Р. Темін, висловив ряд міркувань у тому, геноми вірусу саркоми Рауса зберігається у ураженої їм клітині у вигляді такого собі «провируса », що робить собою не РНК, а … ДНК! Цікава гіпотеза! Але… незрозуміло, як РНК вірусу саркоми Рауса могла перетворитися (!) в ДНК. Молекулярна біологія таких перетворень не знала, а Р. Темін був… дуже молодий і дуже самонадеян.

Слід зазначити, що, на щастя, з тими рисами легко поєднувалися вражаюча працездатність і рідкісна цілеспрямованість. Власне справи, він усе життя займався питанням, що йому запропонував ще студентському гуртку його вчитель Р. Далбекко — механізмом репродукції вірусу саркоми Рауса. Перші 8 років, з 1956 по 1964, привели Теміна до створенню гіпотези провируса, у якому, будемо справедливі, майже хто б повірив, а такі 6 років пішли на доказ цієї гіпотези. У 1970 року Р. Темін, працював у Вісконсинському університеті, навіть від нього на Массачусетському технологічному інституті Д. Балтімор виявили в деяких РНК-содержащих вірусів невідомий досі фермент, здатний синтезувати ДНК-копию на матриці вірусної РНК. Стаття Р. Теміна, опублікований у січневому (за 1972 рік) журналі «Nature », і називалася: «Синтез ДНК, спрямовуваний РНК «. Знову відкритий фермент отримав назва «зворотна транскриптаза «(ревертаза), проте віруси, його містять, почали йменуватися своєрідними і навіть дещо грайливо — «ретровіруси «. Натомість відкриття Р. Темін і Д. Балтімор удостоїлися Нобелівської премії, це були визнано найбільшим подією біології, а вирусогенетической концепції закрилася гігантська брешь.

Ми недарма назвали цей розділ настільки докладно: про онкогенных віруси, природі раку й… що свідчить другом.

Це так: почавши розповідь з гіпотези Борреля стосовно можливої ролі вірусів у походження раку, ми буквально поспіль не можемо зупинитися, потік подій б нас і крім нашого волі змушує стосуватися нових і нових біологічних проблем…

Отже, вивчення першого, по-своєму класичного об'єкта онковирусологии — вірусу курячої саркоми, розпочате Раусом в 1911 року, привело Теміна і Балтімора на відкриття зворотної транскрипції і нового ферменту — ревертазы. Значення цього відкриття виявилося настільки велика, що ми сьогодні торкнутися проблем, далеко виходять далеко за межі і онкології і вирусологии.

З часу видатного відкриття Вотсона і Кріка, тобто із середини 50- x років ХХ століття, явною вважалася основна догма біології, відповідно до якої гени, укладені подвійної спіралі ДНК управляють активністю будь-який клітини у вигляді двох процесів: транскрипції, у якої на ДНК як на матриці, синтезуються молекули РНК, і наступного трансляції, під час чим РНК, як у матриці, синтезуються молекули білків. Шлях ДНК- > РНК->белок здавався єдиним, непорушним і універсальним! РНК- містять віруси здавалися неістотним, хоч і очевидним винятком, про якому й не дуже замислювалися… Ніхто, проте, не сумнівався у цьому, що спадкова інформація У цих вірусів зберігається над ДНК, а РНК, ну решта відбувається «схоже ж », як в ДНК-содержащих вірусів. Досить порівняти репродукцію вірусу поліомієліту і грипу, наприклад, щоб у цій убедиться.

Протягом першого десятиліття після відкриття Теминым і Балтимором зворотної транскрипції, тобто початку 80-х, здавалося, що це незвичний феномен, що лягає спати або зовсім іншу формулу:

РНК-> ДНК->белок, стосується одного з сімейств РНК-содержащих вірусів — ретровірусів, де він і виявили, і більше нікого. Хоча слів немає: сімейство це дуже широке, а представники його заслуговують самого пильної внимания.

У сімейство ретровірусів входить три звані подсемейства:

1. пухлинні вирусы,

2. віруси — збудники деяких повільних инфекций,

3. звані «пенящие «вирусы.

До першого з цих подсемейств ставляться збудники лейкозів і деяких щільних пухлин ссавців, птахів та рептилій, єдиний явний (поки!) збудник пухлинного процесу в людини (вірус так званого Тклітинного лейкозу людей) і агент, викликає… СНІД, — ні більше, ані менше! Зауважимо, проте, що вірус СНІДу зворотний транскриптазу містить, але опухолеродным перестав бути: на відміну свого близького побратима — вірусу Тклітинного лейкозу людини — не трансформує людські лімфоцити, а вбиває их.

До другої подсемейству ставляться збудники деяких про повільних інфекцій. Ми згадували про їхнє існування. Саме поняття що така увів у науку ісландський дослідник У. Сигурдссон 1954-го року, висловивши припущення щодо причини повільної инфекции-скрепи (почесухе овец).

До подсемейству пенящих ставляться віруси, не які мають онкогенностью, але вражаючі багатьох ссавців, включаючи чоловіки й викликають так звані синцитиеобразующие ефекти, тобто злиття клеток.

Вже з цього стислого переліку випливає, що зворотна транскрипція зовсім не рівнозначна злоякісної трансформації. Всім перелічених агентів характерно освіту ДНК-копии вірусної ДНК і убудовування цієї копії в ДНК клетки-хозяина. Саме ця необхідне освіти нових вірусних частинок, такий механізм репродукції цих, вірусів, але наслідки для клітини можуть бути дуже різними: повна загибель (як із СНІД), злиття різних клітин на багатоядерний синцитий (при репродукції пенящих вірусів), і, нарешті - злоякісна трансформація (як із лейкозах і освіті деяких щільних пухлин у ссавців, птахів, рептилій і Т- клітинному лейкозі человека).

Отже, відкрита на моделі онкогенных РНК-содержащих вірусів зворотна транскриптаза виявилася інструментом репродукції цілого ряду неонкогенных ретровірусів. І все-таки це був поки що тільки вірусологія, причому вірусологія лише однієї сімейства РНК-содержащих вірусів. Однак у останні роки почали з’являтися дані про те, що зворотна транскрипція утворилася не так лише за реплікації вірусів, а й у незаражених клітинах дріжджів, комах і млекопитающих.

Як це є і що це? Йдеться цілий напрям досліджень, у сучасної молекулярної генетиці, і дуже важко виділити найсуттєвіше, тим більше дослідження тривають. Але ми попробуем.

Насамперед слід підкреслити, що останні ж роки були відкриті цілком невідомі раніше генетичні елементи, наявні у хромосомах більшості, а очевидно, взагалі всіх організмів (у кожному разі, вони вже виявлено у бактерій, дріжджів, рослин, комах і хребетних) — звані транспозони. Ці елементи спроможні змінювати свого місця в геномі клетки.

За сучасними уявленнями, у зв’язку з відкриттям транспозонов, геном представляється якісно іншим, ніж було у епохи Р. Менделя і Т. Моргана, а й під час відкриття подвійної спіралі ДНК Д. Вотсоном і Ф. Кріком. Геном — це застиглий шматочок якогось невідомого речовини чи навіть цілком конкретної ДНК, а динамічна структура, чимось нагадує атом, має, як відомо, як стабільне ядро, а й весь рій переміщаються елементів (зокрема, електронів) по орбітам навколо. Саме тому академік Р. П. Георгієв слушно зауважив, що «ген постійний своєму мінливості «!

Поза сумнівом у цьому, що й самі транспозони, і характеру їх переміщення відбивають якісь нові, невідомі раніше боку генетичної регуляції, мають найбезпосередніший стосунок до непізнаним ще законам мінливості і еволюції живої матерії. В Інституті відкрито, сутнісно, нова глава в вченні про спадковість і мінливості, причому ми вже читаємо лише передмову до ней…

Щоб переміщатися, транспозони повинен мати певну структуру у кінцевих ділянках. Тільки у такий спосіб можуть вбудовуватися у визначені ділянки хромосоми. Яке було подив учених, з’ясувавши, що структура цих кінцевих ділянок практично будь-яких вивчених транспозонов виявилася аналогічної він у… ретровирусной ДНК. Нині це вже непорушна істина, відома у деталях, які спробуємо популярно изложить.

Синтез ДНК-копии ретровирусной ДНК відбувається у дві фази. У першій — зворотна транскриптаза синтезує так звану «мінус «- нитку ДНК безпосередньо на матриці вирионной РНК. Запалом синтезу є при цьому клітинна транспортна РНК. З другого краю етапі синтезується «плюс «- нитку ДНК, комплементарная першої «мінус «- нитки. І тому як початку потрібні короткі фрагменти вірусної РНК, отрезаемые ферментом від більш довгих її кусков.

Експерименти, проведені Д. Бишопом і X. Вармусом в Каліфорнійському університеті, і навіть Д. Тейлором сьогодні в Інституті онкологічних досліджень, у Філадельфії, показали, що з кінців ретровирусной ДНК-копии, що у лінійної двунитевой формі, є однакові послідовності у кілька сотень пар нуклеотидів. Ці ділянки назвали довгими кінцевими повторами — LTR (від англійського long terminal region). Вони були на обох кінцях ретровирусной ДНК (чому ми пам’ятаємо, що і є провірус Теміна!) абсолютно ідентичними з точністю до одного нуклеотида. Крім того, біля кордонів кожного ЬТК послідовності виявилися також ідентичними, якщо… якщо читати в протилежних напрямах. Вони мусили названі инвертированными повторами. І, насамкінець, було встановлено, що у інтегрованої вірусної ДНК з обох боків довгих кінцевих повторів розташовуються однакові короткі послідовності, належать геному хазяїна. Це означає, що з вбудовування вірусної ДНК в хромосому клітини хазяїна в його місці інтеграції відбувається дупликация.

Ось які реальні механізми встройки геному РНК-содержащего онкогенного вірусу в геном клетки-хозяина, процесу, пророкованого Л. А. Зільбером стосовно вірусному канцерогенезу багато десятиліть назад.

Але, як бачимо, справа у вірусному канцерогенезі. Річ у тім, що транспозони найрізноманітніших живих істот — від бактерій до людини — також є LTR, инвертированные повтори і короткі дуплікації послідовностей на місці інтеграції. Це подібність виявилося настільки істотним, що прийшла думка у тому, що зворотна транскрипція може бути частиною механізму переміщення деяких транспозонов, ніякого відносини, начебто, до ретровирусам які мають. Зокрема, особливого уваги удостоївся транспозон, який отримав назву copia і що становить собою неинтегрированную форму ДНК у культурі клітин плодової мушки дрозофіли, сослужившей генетиці не меншу службу, ніж вірус саркоми Рауса онкології, а вірус мозаїки тютюну — вирусологии.

Спочатку (1981 рік) Еге. Флавелл і Д. Иш-Горовец у Лондоні розробили метод виявлення неинтегрированных форм ДНК copia і встановили, що ця ДНК дуже справляє враження неинтегрированную ретровірусну ДНК в заражених клітинах. Це було цікаво, але ще говорило про реальному походження що така елементів. Важливу інформацію отримано І. Р. Архиповою у Москві, сьогодні в Інституті молекулярної біології АН СРСР. Вона ж її колеги з вичерпної повнотою показали, як і виникнення цих елементів та його переміщення в геномі ввозяться культурі клітин дрозофіли з допомогою зворотної транскрипции.

Інше доказ участі зворотної транскрипції походження і переміщенні транспозона отримали щодо дріжджів до лабораторій Д. Динка в Массачусетському технологічному інституті. Вивчили переміщується генетичний елемент під умовною назвою Ту. У серії образотворчих експериментів з переконливістю було встановлено, що яка переміщається ДНК Туявляется копією з… РНК, котру піддали спеціальної обробці, тому хіба що меченой.

Отже, ДНК генетичного чинника дріжджів, нічого спільного котра має до ретровирусам, є копією не ДНК, а певної РНК. Зрозуміло, що то міг би бути результатом лише зворотної транскрипції. Не дивно, що котрі переміщалися генетичні елементи почали називати ретротранспозонами.

Отже, відкритий новий невідомий раніше спосіб синтезу генів живих істот різного рівня організації: від ретровірусів до ссавців. У такий спосіб є зворотна транскрипція ДНК на матриці РНК. Важливо підкреслити, що синтез ДНК-копий ретровирусной РНК не більш як приватним випадком що така процесу, хоч і відкрили первым.

Це не дивно, але знаменно: почалася ж вся вірусологія з відкриття вірусу мозаїчної хвороби тютюну — не єдиного, та й головного представника царства Віра (особливо у століття тотальної боротьби з курінням!). Схоже, як і зворотна транскрипція ретровирусной РНК теж найголовніша заслуга цього ферментативного механизма.

Є думка (його автор — американський молекулярний біолог Дж. Дарнелл- молодший), що першим значимим речовиною спадковості була б саме РНК, а зовсім на ДНК. Цьому погляду сприяє велика універсальність РНК: вона здатна зберігати інформації і відтворюватися, по суті, як і, як ДНК, та на відміну від нього може безпосередньо спрямовувати синтез білка і вести себе, немов фермент, про що ми згадували у розділі книги.

Усе це дуже цікаво й цілком можливо. Але якщо усе це дуже, то, безперечно, що у певному етапі розвитку життя РНК передала своєї ролі ДНК.

Саме тому зворотна транскрипція є древнім механізмом перенесення інформації з РНК на ДНК. Так, процес, який спочатку розглядали як екзотичну здатність, притаманну лише невеликий групі вірусів, тепер допомагає простежити шлях еволюції, що привів його до життя на основі ДНК.

З усіх цих даних випливають важливі слідства у всім обсуждаемым нами вопросам.

По-перше, стає цілком очевидно, що не можна казати про якому- то загальному походження всіх вірусів. Певне, від цього уразливі все розглянуті вище концепції. Здається явним, що РНК-содержащие віруси — давніші, а ДНК-содержащие — молодші. Адже вірусна РНК в значною мірою зберегла бачимо всі ознаки древньої РНК, які в неї були, коли з урахуванням ДНК ще існувала: РНК-и хранитель генетичного коду цієї групи агентів, і безпосередній організатор синтезу вірусних білків в рибосомах інфікованих клітин, а цілий ряд випадків (стосовно малим рибовирусам) і монопольний організатор всього інфекційного процесу (пригадаємо інфекційність РНК вірусів поліомієліту, арбовирусов тощо. д.).

Не виключено, що це рибовирусы є «справжніми нащадками тих древніх доклеточных форм життя, коли ДНК ще стала практично монопольним хранителем генетичної інформації майже всього живого. У межах цієї гіпотези цілком вірогідним видається уявлення про певний еволюційному ускладненні древніх рибовирусов від пикорнавирусов через арбовирусы до парамиксовирусам і ортомиксовирусам. У переліку можна відзначити збільшення маси рибонуклеиновой кислоти, відповідно кількості вирусиндуцируемых білків, поява окремих ферментів в структурі вириона і, нарешті, сегментацію самого геному, що підвищує можливості генетичного маневрування. Найскладніше у цій низці - вірус грипу з 8 фрагментами РНК й цілим набором ферментів, з вираженої здатністю змінювати свою антигенну структуру й біологічні властивості, можливо, і з самих «молодих » …

Другу групу агентів — ДНК-содержащие віруси дуже подібні на «скажені «гени. По крайнього заходу Д. Б. Голубєв схильний вважати їх таковыми.

Ще 1970 року було опубліковано роботи американця Субак-Шарпа, який порівняв склад молекул нуклеїнових кислот трьох різних груп ДНК- содержа-щих вірусів і лобіювання відповідних тканин хребетних, де ці віруси паразитують. Він встановив, що чотири дрібних вірусу із групи папова (СВ-40, полиомы, папіломи Шопа і папіломи людини) мають нуклеотидное будову та склад, багато в чому подібні до складом тканин людини і тварин. Ця схожість дає підстави для об'єднання ДНК вірусу і клітин та є основою онкогенности цих вірусів. Особливо чітко виявилося це тим самим Субак-Шарпом щодо аденовірусів, серед яких є, як відомо, і высокоонкогенные та практично неонкогенные представники. Отож, у высокоонкогенных аденовірусів гомология вірусної та клітинної ДНК виражена на рівні, а й у неонкогенных — взагалі выражена.

Чи все ДНК-содержащие віруси — скажені фрагменти клітинних ДНК чи лише малі (якщо це взагалі так), ми знаємо. Можливо, раз виникнувши, що така агенти потім самостійно прогресивно еволюціонували від паповавирусов до вірусів групи віспи — складним, великим, багато оснащеним ферментами (майже бактериям).

Жоден людей я не готовий наполягати у тому, що висловлені припущення незаперечні. Але який було реальне походження всіх цих агентів (як ми помітили, крім ретровірусів), вони, на думку Д. Б. Голубєва, живі істоти, мають свою еволюційну пам’ятати історію та «борються «за виживання свого виду за всіма законами дарвінівської биологии.

Хіба ж ретровіруси? Щоб сказати щось про походження, потрібно зробити новий екскурс до області онковирусологии, у її сучасне состояние.

Вироиды.

Нещодавно встановили, що збудниками деяких пухлин рослин є маленькі «голі «, тобто. позбавлені білкової оболонки, вільні молекули РНК. Їх назвали вироидами. Це замкнуті в кільце одноцепочечные молекули із довжиною ланцюга приблизно 360 нуклеотидів (мовляв. маса 12(10−4 Да).

Отже, вони у 10 разів менше інфекційних РНК найменших з відомих досі вірусів, і, отже, це дрібні збудники хвороб. Вироиды викликають хвороби картоплі, цитрусових, огірків, хризантем, хмелю, кокосових пальм та інших растений.

Г. Шлегель «Загальна мікробіологія », М., Світ, 1987

Генетическая інженерія рослин: звершення і надії (Лутова Л.А., 2000), БИОЛОГИЯ

ПоказатьСвернуть
Заполнить форму текущей работой